说明:收录25万 73个行业的国家标准 支持批量下载
文库搜索
切换导航
文件分类
频道
联系我们
问题反馈
文件分类
联系我们
问题反馈
批量下载
ICS 65.020.01 B 16 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T29393—2012 柑桔黄龙病菌的检疫检测与鉴定 Detection and identification of Candidatus liberobacter asiaticum 2012-12-31发布 2013-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T29393—2012 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。 本标准起草单位:全国农业技术推广服务中心、浙江省植物保护检疫局。 本标准主要起草人:吴立峰、严铁、林云彪、项宇、朱景全、朱莉。 1 GB/T293932012 柑桔黄龙病菌的检疫检测与鉴定 1范围 本标准规定了柑桔黄龙病菌亚洲种Candidatusliberobacterasiaticumjagoueixetal.的检测与鉴 定方法。 本标准适用于植物检疫过程中对柑桔黄龙病菌亚洲种的检测与鉴定。 2病菌基本信息 中文名:柑桔黄龙病菌。 学名:Candidatus liberobacter asiaticum jagoueixet al. 病害英文名:CitrusHuanglongbingHLB。 属薄壁菌门Gracilicutes、韧皮部杆菌属Liberobacter。 3方法原理 根据柑桔黄龙病菌侵染柑桔植株发病典型症状进行田间鉴定;经嫁接或经柑桔木虱(Diaphorina citri)传病后,可根据木本指示植物发病症状鉴定;聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction,PCR)检 测技术对柑桔黄龙病菌DNA进行体外扩增,可得到快速、有效的鉴定结果。 4仪器及用具 紫外线透射仪或凝胶成像系统,离心机,核酸电泳仪,pH计,移液器:10μL、20μL、100μL、 1000μL,PCR仪,水浴器、超纯水系统,电子天平。 5试剂与材料 TAE缓冲液,三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸(Tris-HCI),乙二胺四乙酸(EDTA),十二烷基硫酸钠 (SDS),乙酸钠(NaAc),Taq酶,10XPCR缓冲液,25mmol/L镁离子(Mg²+),20mmol/L脱氧核苷三 磷酸(dNTP),5μLDNA荧光染料(GV),琼脂糖,溴酚蓝,高锰酸钾,三氯甲烷(氯仿),异戊醇,异丙醇, 乙醇。 6症状识别法 柑桔黄龙病主要鉴定依据是田间出现的“叶片斑驳型黄化”和“黄梢”。叶片斑驳型黄化即叶片转绿 后从主、侧脉附近和叶片基部开始黄化,黄化部分扩展形成黄绿相间分布不均的斑驳,后来可以全叶黄 化。黄梢即在发病初期,绿色树冠上少部分新梢枝叶片黄化。有些柑桔结果树果实呈“红鼻子果”。在 柑桔黄龙病区符合上述典型症状的病苗、病树可直接鉴定为柑桔黄龙病。 对难以下结论的疑似病苗、病树,可根据具体情况选用以下一种或几种检测方法进行鉴定。 1 GB/T293932012 7指示植物鉴定法 7.1指示植物鉴定柑桔接穗带菌 以柑作指示植物。鉴定时用带有2~3个病芽的接穗,在健康槛柑实生苗上进行嫁接。重复3次 (嫁接工具每次使用前用高锰酸钾溶液消毒)。待嫁接愈合后,在其上方约1cm处剪除指示植物的主 干。每株疑似病株至少嫁接30株以上健康柑,以健康槛柑实生苗作对照,定期观察、记载指示植物新 抽枝叶的症状。一般柑桔黄龙病在指示植物上的潜育期为4~12个月。符合第6章所描述的发病症状 可鉴定为柑桔黄龙病。 7.2指示植物鉴定柑桔木虱带菌 从田间疑似病株上,采集柑桔木虱成虫50~100头,接到指示植物柑上饲养,定期观察、记载指示 植物症状。符合第6章描述的发病症状可鉴定接种柑桔木虱带有柑桔黄龙病菌。 8PCR检测法 8.1取样 取样包括疑似柑桔黄龙病叶片和柑桔木虱成虫二类。采集疑似柑桔黄龙病叶每样品20张叶片,直 接放于信封内(切忌塑料袋包装)。采集无病树和病树枝梢上柑桔木虱成虫每样品50~100头,置于 70%乙醇内浸泡2h~3h,然后取出放于塑料管内,供检测。样品可放入4℃冰箱保存。 将取样情况填人《植物有害生物调查抽样记录表》(见附录A)。 8.2方法 按附录B的规定进行 8.3结果及判定 每次扩增反应均设空白对照、来源可靠的阳性对照和不含病原DNA的阴性对照各1个,每个样品 均进行3次重复。如果阳性对照电泳后出现一条563bp特异性条带,阴性对照和空白对照电泳后没有 条带,试验结果成立,否则,结果不成立。 在试验结果成立的前提下,供试样品出现与阳性对照一样的条带,样品判定为阳性,即检出柑桔黄 龙病菌;供试样品未出现与阳性对照一样的条带,样品判定为阴性,即不带柑桔黄龙病菌。 9 记录与档案 将检测结果填入表格《植物有害生物样本鉴定报告》(见附录C),将检测的有关数据、图片等资料整 理保存。 10 标本保存 柑桔叶片放人4℃冰箱保存和柑桔木虱浸70%乙醇保存。 2 GB/T29393—2012 附录A (规范性附录) 植物有害生物调查抽样记录表 表A.1 植物有害生物调查抽样记录表 编号: 生产/经营者 地址及邮编 联系/负责人 联系电话 调查日期 抽样地点 样品 品种 调查代表 植物名称(中文名和学名) 植物生育期 植物来源 编号 名称 株数或面积 症状描述: 发生与防控情况及原因: 抽样方法、部位和抽样比例: 备注: 抽样单位(盖章): 生产/经营者 填表人(签名): 现场负责人 年月日 年月日 注:本单一式两联,第一联抽样单位存档,第二联交受检单位。 3
GB-T 29393-2012 柑桔黄龙病菌的检疫检测与鉴定
文档预览
中文文档
8 页
50 下载
1000 浏览
0 评论
0 收藏
3.0分
赞助2元下载(无需注册)
温馨提示:本文档共8页,可预览 3 页,如浏览全部内容或当前文档出现乱码,可开通会员下载原始文档
下载文档到电脑,方便使用
赞助2元下载
本文档由 思安 于
2023-02-11 17:31:00
上传分享
举报
下载
原文档
(1018.3 KB)
分享
友情链接
NIST.SP.800-190 容器安全指南.pdf
GB-T 42755-2023 人工智能 面向机器学习的数据标注规程.pdf
杨泉 数据管理能力成熟度评估模型 DCMM标准解读 2022.pdf
ISO 17825-2016.pdf
GB-T 25283-2023 矿产资源综合勘查评价规范.pdf
T-ZZB 0334—2018 电子驻车 EPB 制动钳总成.pdf
GB-T 30363-2013 森林植被状况监测技术规范.pdf
GB-T 29000-2012 单板干燥节能技术规范.pdf
GB-T 5271.17-2010 信息技术词汇第17部分数据库.pdf
GB-T 42002-2022 跨境电子商务交易类产品信息多语种描述 智能手机.pdf
GB-T 42461-2023 信息安全技术 网络安全服务成本度量指南.pdf
GB-T 11436-2012 软磁铁氧体材料成品、半成品化学分析方法.pdf
硅创社2024002-AIGC新书推荐榜2月.pdf
GB-T 37904-2019 土方机械 步履式液压挖掘机.pdf
GB-T 3954-2022 电工圆铝杆.pdf
GB-T 41793-2022 人造革合成革试验方法 潜在酚黄变的测定.pdf
JCT 2743-2022 平板玻璃生产企业节能技术指南.pdf
GB-T 42619-2023 增材制造 工艺参数库构建规范.pdf
GB-T 3610-2010 电池锌饼.pdf
GB-T 32040-2015 石化企业节能量计算方法.pdf
交流群
-->
1
/
3
8
评价文档
赞助2元 点击下载(1018.3 KB)
回到顶部
×
微信扫码支付
2
元 自动下载
官方客服微信:siduwenku
支付 完成后 如未跳转 点击这里 下载
站内资源均来自网友分享或网络收集整理,若无意中侵犯到您的权利,敬请联系我们
微信(点击查看客服)
,我们将及时删除相关资源。