ICS 65.020.30 B 43 备案号：55163-2017 青 海 DB 63 省 地 方 标 准 DB63/T 1592—2017 藏獒细管冷冻精液人工授精技术操作规程 2017 - 06 - 20 发布 青海省质量技术监督局 2017 - 09 - 20 实施 发 布 DB63/T 1592—2017 前 言 本规程按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本规程由青海省农牧厅归口。 本规程起草单位：青海省家畜改良中心，青海省畜牧兽医科学院。 本规程主要起草人：薛晓蓉、于明胜、杨桂梅、张晋青、孙永刚、胡宁玺、刘宁、李强、马元梅、 常永梅、赵静、赵莉渲、郭占泽、周倩、刘于刚。 I DB63/T 1592—2017 藏獒细管冷冻精液人工授精技术操作规程 1 范围 本规程规定了藏獒细管冷冻精液人工授精技术中母獒及其选配条件、发情鉴定、输精前准备、输精、 妊娠鉴定、记录的要求。 本规程适用于母獒人工授精技术应用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 5458 液氮生物容器 NY 1870 藏獒 DB63/T 1591 藏獒细管冷冻精液 3 母獒及其选配条件 母獒体质健康、繁殖机能正常，且未妊娠。并根据母獒繁育需求选择适配公獒的细管冷冻精液。 4 母獒的发情鉴定 4.1 外部观察 通过母獒的外部表现症状和生殖器官变化判断母獒是否发情和发情程度，具体内容见表1。 表1 期别 外部表现 生殖器官变化 4.2 发情鉴定外部表现症状和生殖器官变化 发情初期（不接受爬跨） 发情盛期（接受爬跨期） 发情末期（拒绝爬跨期） 母獒兴奋不安，采食减少，爬跨其它 母獒喜静，拍它后臀时或它 藏獒，而它獒爬跨不予接受，一爬即 獒爬跨时站立不动、后肢张 跑或咬它獒。 开，接受爬跨。 阴门硬肿，阴道排出含暗红色血液的 阴门松软，阴道排出淡黄色 阴门收紧，阴道不排或排出 分泌物。 或乳白色带丝的粘液。 少量粘液。 母獒转入平静，它獒爬跨时， 臀部避开。 阴道分泌物镜检 通过显微镜检查阴道分泌物中角化上皮细胞。 1 DB63/T 1592—2017 5 输精前准备 5.1 主要器材 液氮罐、恒温水浴锅、200倍或400倍的显微镜、金属输精器。 5.2 输精器清洗和消毒 金属输精器，洗净后置电热干燥箱120℃保持1h，自然冷却待用。 5.3 母獒外阴部清洗消毒 输精前，母獒外阴部用温热的开水清洗或用0.1％新洁尔灭消毒处理。 5.4 细管冷冻精液解冻 预先把水浴锅水温加热至37℃，用镊子取一支冷冻后的细管精液迅速浸泡入37℃水中晃动8s后立即 取出，用吸水纸或纱布擦干，再用细管剪剪去超声波封口端，取10ul滴于精液于载玻片上加盖盖玻片即 可镜检。 5.5 解冻后精液质量 解冻后精液质量应符合DB63/T 1591的要求。 6 输精 6.1 输精时间确定 6.1.1 外部观察法 通过母獒的外部表现症状和生殖器官的变化判定输精时间，从第1d滴血开始算起，第10d～14d为最 佳输精时间。 6.1.2 阴道分泌物镜检法 通过显微镜检查阴道分泌物中上皮细胞的角化程度，以上皮细胞角化程度最高时为最佳输精时间。 6.2 输精器使用方法 剪去细管精液封口，剪口应正，断面应齐。将剪去封口的细管精液迅速装入输精器管内。具体步骤 为：剪去封口端的前端，输精器推杆后退，细管装至管内，输精器管进入塑料外套管，管口顶紧外套管 中固定圈，输精器管前推到头，外套管后部与输精器后部螺纹处拧紧，且结合处紧密。 6.3 输精部位 输精人员左手扶住母獒的臀部，右手将装好细管冷冻精液的输精器缓慢送入阴道，沿背脊方向前行， 约到20㎝时有阻力推不动输精器，即已到达阴道穹窿部，此时可将输精器后退1㎝～2㎝，并将输精器外 端下压10°，同时向内推送3㎝～4㎝后将输精器放平继续推进5㎝～6㎝，到达子宫颈口，此时输精即可。 6.4 输精剂量 一次输精剂量1剂，隔24h后再输精1次，共输精2次。 2 DB63/T 1592—2017 7 妊娠鉴定 配种24d后做B超妊娠检查，如空怀则复配。 8 记录 记录内容包括母獒号、母獒发情时间、发情观察鉴定、发情后期流血时间、输精时间、公獒号及细 管冷冻精液编号、输精操作人员。 _________________________________ 3