ICS 65.020.20 B 16 DB36 江 西 省 地 方 标 准 DB 36/T 1031—2018 水稻二化螟抗药性检测技术规程 饲料浸药 法 Technological rules for monitoring insecticide resistance in striped stem borer（Chilo suppressalis Walker）using artificial diet dipping bioassay method 2018 - 03 - 19 发布 江西省质量技术监督局 2018 - 09 - 20 实施 发 布 DB36/T 1031—2018 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 术语和定义 ........................................................................ 1 3 试剂与材料 ........................................................................ 1 4 主要仪器设备 ...................................................................... 1 5 试验步骤 .......................................................................... 2 6 数据统计与分析 .................................................................... 3 7 抗性水平评估 ...................................................................... 3 8 检测报告编写……………………………………………………………………………………………….4 附录 A（资料性附录） 部分杀虫剂对水稻二化螟的敏感毒力基线 ............................ 5 附录 B（资料性附录） 二化螟人工饲料的组份及其配比 .................................... 6 I DB36/T 1031—2018 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由江西省农业厅提出并归口。 本标准起草单位：江西省农业科学院植物保护研究所、江西省农业生态与资源保护站、江西省余江 县植保植检站、江西省植保植检局。 本标准主要起草人：黄水金、孙杨、秦文婧、熊焕华、刘晖、王惠明、徐样庚、王希、史建苗、盛 琦、饶喜。 II DB36/T 1031—2018 水稻二化螟抗药性检测技术规程 饲料浸药法 1 范围 本标准规定了饲料浸药法检测二化螟（Chilo suppressalis (Walker)）抗药性方法的术语和定义、 试剂与材料、主要仪器设备、实验步骤、数据统计与分析、抗性水平评估、检测报告表编写。 本标准适用于杀虫剂对二化螟室内毒力测定和抗药性评估。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 抗药性 Insecticide resistance 昆虫忍耐杀死正常种群大部分个体的药量的能力，并在其种群中发展起来的能力。 2.2 敏感基线 Susceptibility baseline 在某种农药使用之前，昆虫敏感品系的毒力基线LC50。 2.3 饲料浸药法 Artificial diet dipping bioassay method 二化螟幼虫接触、取食浸渍农药的人工饲料而中毒死亡的毒力测定方法。 3 试剂与材料 3.1 生物试材 二化螟：4龄初期幼虫。 3.2 试验试剂与药剂 试剂为分析纯，药剂为农药原药。 4 主要仪器设备 电子天平（感量0.0001g），手持搅拌机，料理机,切片器，毛笔，眼科镊，移液器，平底玻璃管（直 径3cm，高5cm），1000ml烧杯（直径13cm，高15cm），恒温培养箱或人工气候箱，高温高压湿热灭菌锅， 微波炉。 1 DB36/T 1031—2018 5 试验步骤 5.1 卵块采集、管理及人工饲料配制 5.1.1 卵块采集 在成虫盛发期，从田间诱蛾带回室内产卵或从水稻田直接采集二化螟卵块。 5.1.2 卵块孵化及幼虫管理 在玻璃培养皿（直径9cm）中放入滤纸3片～4片，并加入适量灭菌蒸馏水保湿，将卵块放入其中， 保湿培养至卵块黑头时，将黑头卵块放入装有饲料的玻璃管中，每个玻璃管中放入1个～2个卵块，塞上 棉花塞。待幼虫从卵块中孵出并爬至饲料上后，将卵块残余部分从玻璃管中挑出来，然后将幼虫放置于 温度28±1℃，相对湿度60%～70%，光周期为（白天:黑夜）16h:8h（下光源）的光照培养箱中培至4龄 初期。 5.1.3 药剂配制 农药原药用有机溶剂（如丙酮、二甲基甲酰胺等）充分溶解，加入10％（每100ml体积终溶液中含 有溶质的质量为10mg）用量的Triton-X100（或吐温80）加工成制剂，并用蒸馏水稀释。根据预备试验 结果，按照等比例方法设置5个～7个系列质量浓度，每质量浓度药液量不少于200ml。 5.1.4 人工饲料配制方法 人工饲料按配方进行配制（见附录B）。具体配制方法如下： a) 将各组分按配比称重，备用； b) 将新鲜的茭白切碎，加入水，放入料理机中磨碎并匀浆，匀浆后将其倒入盛有大豆粉、酵母粉、 干酪素和蔗糖的灭菌桶中，将上述 5 种组分充分搅拌均匀后，置于高压蒸汽灭菌锅中，于 125℃ 下灭菌 30min，灭菌完毕后，取出备用； c) 琼脂中加入纯净水，用微波炉加热并煮至完全溶解后，将其倒入步骤（2）中已灭菌好的饲料 中，用手持搅拌机搅拌混匀，并冷却至 60℃左右备用； d) 将称好的抗坏血酸钠、尼泊金酯、山梨酸、胆固醇、氯化胆碱、威氏盐、复合维生素放入烧杯 中，用少量温开水溶解，然后将其倒入步骤（3）中的饲料中，再加入 40%的甲醛，搅拌直至 完全均匀； e) 将搅拌好的饲料倒入无菌的保鲜盒中，完全冷却凝固后存放于 4℃冰箱中备用。 5.2 处理方法 用切片器将饲料切成1.2mm薄片，然后将饲料薄片挑入至药液中浸渍10s，将浸渍药液后的饲料薄片 放置于呈45度角的纱网平面上晾干30min后挑入至平底玻璃管中（6片/管）。再将4龄初期二化螟幼虫挑 入（10头/管）。将其置于温度28±1℃，相对湿度60%～70%，光周期为（白天:黑夜）16h:8h（下光照） 的培养箱中。每个浓度4次重复，每个重复处理10头试虫。 5.3 结果检查 根据杀虫剂的杀虫特性分别于接虫后的48h～96h检查。沙蚕毒素类、菊酯类、有机磷类、大环内酯 类药剂在药后48h检查；昆虫生长调节剂类和双酰胺类药剂在药后96h检查。死亡标准为：以小毛笔或尖 锐镊子轻触虫体，不能正常爬行者视作为死亡个体。 2 DB36/T 1031—2018 6 数据统计与分析 6.1 计算方法 根据调查数据，计算各处理的校正死亡率。按公式（1）和（2）计算，计算结果均保留到小数点后 两位： P1 = K ×100% N ………………………………………（1） 式中： P1 ——死亡率，单位为百分率（%）； K——表示死亡虫数，单位为头； N——表示处理总虫数，单位为头。 P2 = Pt − P 0 × 100 % 1 − P0 ……………………………………（2） 式中： P2 ——校正死亡率，单位为百分率（%）； Pt ——处理死亡率，单位为百分率（%）； P0 ——空白对照死亡率，单位为百分率（%）。 若对照死亡率<5％，无需校正；对照死亡率在5％～20％之间，应按公式（2）进行校正；对照死亡 率>20％，试验需重做。 6.2 统计分析 采用SAS、EPA、POLO、BA、DPS等统计分析系统软件的机率值分析法进行统计分析，求出每个药剂 的毒力回归方程式、LC50值及其95％置信限、b值及其标准误。 7 抗性水平评估 7.1 二化螟敏感毒力基线的制定 二化螟抗性监测的敏感毒力基线见附录A。 7.2 抗性水平的分级标准 抗性水平的分级标准见表1。 表1 二化螟抗性水平的分级标准 抗性水平分级 抗性倍数 敏感 RR≤5.0 低水平抗性 5.0＜RR≤10.0 中等水平抗性 10.0＜RR≤100.0 高水平抗性 RR＞100.0 7.3 抗性水平的计算与评估 3 DB36/T 1031—2018 7.3.1 根据敏感品系的 LC50 值和测试种群的 LC50 值，计算测试种群的抗性倍数。按下式计算，计算结 果均保留到小数点后一位： 抗性倍数=测试种群的LC50/敏感品系的LC50。 7.3.2 按照抗性水平的分级标准，对测试种群的抗性水平作出评估。 8 检测报告编写 根据统计结果和抗性水平评估，写出正式抗性检测报告，并列出原始数据。 4 DB36/T 1031—2018 附 录 A （资料性附录） 部分杀虫剂对水稻二化螟的敏感毒力基线 部分杀虫剂对二化螟的敏感毒力基线见表A.1 表A.1 部分杀虫剂对二化螟敏感品系的毒力基线 药剂 LD-P 线(Y=) LC50（mg a.i./L) 95%置信限 7.9997+2.2221x 0.0447 0.0366-0.0545 阿维菌素 6.9889+1.8571x 0.0849 0.0663-0.1088 杀虫环 5.8204+1.5219x 0.289 0.2203-0.3792 杀虫单 4.863+1.614x 1.2159 0.9687-1.5262 氯虫苯甲酰胺 5.0842+1.9065x 0.9033 0.7250-1.1255 氟苯虫酰胺 3.5468+3.2260x 2.8215 2.4410-3.2613 甲氧虫酰肼 3.9067+2.0171x 3.4837 2.7819-4.3625 三唑磷 3.2009+3.0551x 3.8805 3.2819-4.5883 水胺硫磷 2.3008+3.7383x 5.2727 4.742-5.8629 丙溴磷 2