ICS  65.020.20 B 38 DB34 安 徽 省 地 方 标 准 DB 34/T 2824—2017 中草药中 4 种砷形态的测定 高效液相色谱 —电感耦合等离子体质谱法 Determination of four Arsenic species in Chinese medicinal materials-HPLC-ICP/MS method 文稿版次选择 2017 - 03 - 30 发布 安徽省质量技术监督局 2017 - 04 - 30 实施 发 布 DB34/T 2824—2017 前    言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省检验检疫科学技术研究院提出。 本标准由安徽省动植物检验检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省检验检疫科学技术研究院、安徽省农业科学院茶叶研究所。 本标准主要起草人：吕亚宁、韩芳、雷攀登、胡艳云、沈贵兰、宋伟、丁磊、周典兵、郑平、盛旋。 I DB34/T 2824—2017 中草药中 4 种砷形态的测定 高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法 1 范围 本标准规定了中草材中的一甲基砷（MMA）、二甲基砷（DMA）、砷酸 As(Ⅴ)和亚砷酸 As(Ⅲ)的高 效液相色谱-电感耦合等离子体质谱（HPLC-ICP/MS）测定方法。 本标准适用于白芍、枸杞、甘草、黄芪等中草药植物中一甲基砷、二甲基砷、砷酸 As(Ⅴ)和亚砷 酸 As(Ⅲ)的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法原理 试样经水煎煮提取、离心，经滤膜过滤后，注入高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用仪，在 一定浓度范围内，待测元素的离子强度与含量成正比，与标准系列比较定量。 4 试剂和材料 4.1 除另有说明外，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 无水乙酸钠：分析纯。 4.4 硝酸铵：优级纯。 4.5 磷酸二氢钠：分析纯。 4.6 乙二胺四乙酸二钠：分析纯。 4.7 氢氧化钠：分析纯。 4.8 10％甲醇水溶液：量取 100 mL 甲醇加 900 mL 水，混合均匀待用。 4.9 砷酸盐[As(Ⅴ)]、亚砷酸盐[As(Ⅲ)]、一甲基砷、二甲基砷标准储备液(1000 μg/mL)：有证标准 物质，纯度大于等于 99％。 4.10 As(Ⅴ)、As(Ⅲ)、一甲基砷、二甲基砷标准中间液(1000 μg/L)：分别吸取 1.0 mL 上述单标溶液 （4.8）于 100 mL 容量瓶中，加水稀释并定容至刻度。现用现配。 4.11 As(Ⅴ)、As(Ⅲ)、一甲基砷、二甲基砷混合标准工作溶液：分别吸取 As(Ⅴ)、As(Ⅲ)、一甲基 砷、二甲基砷标准中间液（4.7），用水稀释配制混合标准溶液，使终浓度分别为：二甲基砷：5 μg/L、 10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L、100 μg/L；一甲基砷：6 μg/L、10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L、100 μg/L； 1 DB34/T 2824—2017 As(Ⅲ)：4 μg/L、10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L、100 μg/L；As(Ⅴ)：2 μg/L、10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L、100 μg/L。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用仪。 5.2 粉碎设备：粉碎机，剪刀或其它合适的粉碎设备。 5.3 电子天平：精确至 0.0001 g。 5.4 离心机。 5.5 C18 固相萃取柱或相当者：500 mg，3 cc。使用前分别用 5 mL 甲醇和 5 mL 水预处理，保持柱体 湿润。 6 试样制备 取代表性样品不少于 100 g，均匀取样后用剪刀将固体试样剪成碎末后混匀，或用高速粉碎机粉碎 成粉末，装入洁净的称样容器内，密封并标明标记。 7 测定步骤 7.1 提取和净化 称取粉碎后的试样约 2.0 g（精确至 0.001 g）于 100 mL 的小烧杯中，加入约 50 mL 水，加热 至沸腾后保持微沸 50 min，倒出上层清液，再重复煎煮一次，将两次溶液合并，过滤并定容至 50 mL。 将定容液倒入 100 mL 离心管中，8000 r/min 离心 10 min，吸取上层清液，经过 0.45 m 水系滤膜 过滤后进 HPLC-ICP/MS 进行分析。 若离心后的提取液颜色过深，则先经过 C18 固相萃取柱净化，去除色素后再经水系滤膜过滤后进 样分析。 7.2 仪器参考条件 7.2.1 液相色谱参考条件 7.2.1.1 色谱柱：AS19 阴离子交换色谱分析柱（250 mm×4mm），AG19 阴离子交换色谱保护柱（10 mm ×4 mm）； 7.2.1.2 流动相：含 10 mmol/L 无水乙酸钠、2 mmol/L 硝酸铵、2 mmol/L 磷酸二氢钠和 0.2 mmol/L 乙二胺四乙酸二钠的水溶液。分别称取 0.820 g 无水乙酸钠、0.160 g 硝酸铵、0.240 g 磷酸二氢钠、 0.075 g 乙二胺四乙酸二钠，加蒸馏水 900 mL，用 4％氢氧化钠水溶液调 pH 至 10.7 后，用水定容 至 1000 mL。将配好的溶液过 0.45 m 水系滤膜过滤，超声水浴中脱气 30 min 后备用。 7.2.1.3 流速：1.0 mL/min； 7.2.1.4 洗脱方式：等度洗脱； 7.2.1.5 进样体积：50 l。 7.2.2 7.2.2.1 7.2.2.2 2 电感耦合等离子体质谱仪参考条件 仪器参数及使用条件参见附录 B； 检测质量数 m/z=75（As）。 DB34/T 2824—2017 7.3 测定 在上述工作条件下，将标准使用液和样品溶液分别进样，以峰面积为纵坐标，以标准溶液中各目标 化合物浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据标准曲线得到试样溶液中 As(Ⅴ)、As(Ⅲ)、MMA、DMA 含量， 若测定结果超出线性范围，则将样液适当稀释后测定。 四种砷形态标准物质以保留时间定性，其保留时间分别为 DMA 3.09 min，As(Ⅲ) 3.61 min，MMA 5.98 min，As(Ⅴ) 8.67 min，色谱图参见附录A。 7.4 空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行。 8 结果计算 测定结果按公式（1）计算： X  Ci - C0   V m .................................... (1) 式中： X —— 试样中一甲基砷（或二甲基砷、As(Ⅲ)、As(Ⅴ)）的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； Ci —— 试样消解液中一甲基砷（或二甲基砷、As(Ⅲ)、As(Ⅴ)）的浓度，单位为微克每升（μg/L）； C0 —— 试剂空白溶液中一甲基砷（或二甲基砷、As(Ⅲ)、As(Ⅴ)）的浓度，单位为微克每升（μg/L）； V —— 样液的定容体积，单位为升（L）； m —— 试样的质量，单位为克（g）。 注：计算结果保留两位有效数字。 9 测定低限和精密度 9.1 测定低限 本标准对砷形态的测定低限分别为一甲基砷 0.15 mg/kg，二甲基砷 0.125 mg/kg，As(Ⅲ) 0.1 mg/kg，As(Ⅴ) 0.05 mg/kg。 9.2 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 15％。 3 DB34/T 2824—2017 AA 附 录 A （资料性附录） 砷形态标准色谱图 图A.1 高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法测定砷形态标准色谱图 注：图中色谱峰从左至右依次为 DMA、As（Ⅲ）、MMA 和 As(Ⅴ) 4 DB34/T 2824—2017 BB 附 录 B （资料性附录） 电感耦合等离子体质谱仪工作条件 表B.1 电感耦合等离子体质谱仪工作条件 项目 工作参数 射频功率 1100 W 辅助气流量 1.20 L /min 冷却气流量 15.00 L /min 载气流量 0.85 L /min 透镜电压 6.00 V _________________________________ 5