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ICS 11.220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2840--2015 猪细小病毒间接ELISA抗体检测方法 Indirect ELISA for detection of antibodies against Porcine parvovirus 行业标准信息服务平台 2015-10-09发布 2015-12-01实施 中华人民共和国农业部 发布 ICS 11.220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2840--2015 猪细小病毒间接ELISA抗体检测方法 Indirect ELISA for detection of antibodies against Porcine parvovirus 行业标准信息服务平台 2015-10-09发布 2015-12-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T2840—2015 猪细小病毒间接ELISA抗体检测方法 1范围 本标准规定了细小病毒科细小病毒属的猪细小病毒抗体的间接ELISA检测方法。 本标准适用于猪细小病毒抗体监测以及流行病学调查。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫 中华人民共和国农业部公告【2003】第302号兽医实验室生物安全技术管理规范 3缩略语 下列缩略语适用于本文件: PPV:猪细小病毒Porcineparvovirus ELISA:酶联免疫吸附试验Enzyme-linkedimmunosorbentassay OD:光密度opticaldensity r/min:转/分钟rotationsperminute 4试剂 4.1猪细小病毒VP2重组蛋白(re-VP2) 克隆猪细小病毒结构蛋白VP2抗原优势区基因,用pET-32a表达载体进行原核表达,亲和层析法 纯化重组蛋白。获得的重组蛋白浓度应≥1mg/mL,纯度应≥95%。具体过程见附录A。 4.2阳性血清对照 选取5月龄健康猪2头,用猪细小病毒疫苗按规定剂量进行免疫,间隔3周免疫2次,第二次免疫1 个月后开始采血分离血清,用血凝抑制试验测定其抗体效价。当抗体的血凝抑制效价达到1:1024时 采血分离血清,将血凝抑制效价为1:1024的阳性血清用样品稀释液(参见B.4)进行1:50稀释,即为 阳性血清对照。 4.3阴性血清对照 采集无母源抗体、未免疫猪细小病毒疫苗的健康猪血清,经血凝抑制试验检测,结果为猪细小病毒 抗体阴性,用样品稀释液(参见B.4)进行1:50稀释,即为阴性血清对照。 4.4包被液、洗涤液、封闭液、样品稀释液、酶标抗体稀释液、底物显色液、终止液配制方法分别见B.1、 B. 2、B. 3、B. 4、B. 5、B. 6、B. 7。 5器材和设备 一次性注射器、恒温培养箱、震荡混匀仪、移液器(200uL、1000μL)、多道移液器(200μL)、酶标板、 酶联免疫检测仪等。 1 NY/T2840—2015 猪细小病毒间接ELISA抗体检测方法 1范围 本标准规定了细小病毒科细小病毒属的猪细小病毒抗体的间接ELISA检测方法。 本标准适用于猪细小病毒抗体监测以及流行病学调查。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫 中华人民共和国农业部公告【2003】第302号兽医实验室生物安全技术管理规范 3缩略语 下列缩略语适用于本文件: PPV:猪细小病毒Porcineparvovirus ELISA:酶联免疫吸附试验Enzyme-linkedimmunosorbentassay OD:光密度opticaldensity r/min:转/分钟rotationsperminute 4试剂 4.1猪细小病毒VP2重组蛋白(re-VP2) 克隆猪细小病毒结构蛋白VP2抗原优势区基因,用pET-32a表达载体进行原核表达,亲和层析法 纯化重组蛋白。获得的重组蛋白浓度应≥1mg/mL,纯度应≥95%。具体过程见附录A。 4.2阳性血清对照 选取5月龄健康猪2头,用猪细小病毒疫苗按规定剂量进行免疫,间隔3周免疫2次,第二次免疫1 个月后开始采血分离血清,用血凝抑制试验测定其抗体效价。当抗体的血凝抑制效价达到1:1024时 采血分离血清,将血凝抑制效价为1:1024的阳性血清用样品稀释液(参见B.4)进行1:50稀释,即为 阳性血清对照。 4.3阴性血清对照 采集无母源抗体、未免疫猪细小病毒疫苗的健康猪血清,经血凝抑制试验检测,结果为猪细小病毒 抗体阴性,用样品稀释液(参见B.4)进行1:50稀释,即为阴性血清对照。 4.4包被液、洗涤液、封闭液、样品稀释液、酶标抗体稀释液、底物显色液、终止液配制方法分别见B.1、 B. 2、B. 3、B. 4、B. 5、B. 6、B. 7。 5器材和设备 一次性注射器、恒温培养箱、震荡混匀仪、移液器(200uL、1000μL)、多道移液器(200μL)、酶标板、 酶联免疫检测仪等。 1 NY/T2840—2015 猪细小病毒间接ELISA抗体检测方法 1范围 本标准规定了细小病毒科细小病毒属的猪细小病毒抗体的间接ELISA检测方法。 本标准适用于猪细小病毒抗体监测以及流行病学调查。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫 中华人民共和国农业部公告【2003】第302号兽医实验室生物安全技术管理规范 3缩略语 下列缩略语适用于本文件: PPV:猪细小病毒Porcineparvovirus ELISA:酶联免疫吸附试验Enzyme-linkedimmunosorbentassay OD:光密度opticaldensity r/min:转/分钟rotationsperminute 4试剂 4.1猪细小病毒VP2重组蛋白(re-VP2) 克隆猪细小病毒结构蛋白VP2抗原优势区基因,用pET-32a表达载体进行原核表达,亲和层析法 纯化重组蛋白。获得的重组蛋白浓度应≥1mg/mL,纯度应≥95%。具体过程见附录A。 4.2阳性血清对照 选取5月龄健康猪2头,用猪细小病毒疫苗按规定剂量进行免疫,间隔3周免疫2次,第二次免疫1 个月后开始采血分离血清,用血凝抑制试验测定其抗体效价。当抗体的血凝抑制效价达到1:1024时 采血分离血清,将血凝抑制效价为1:1024的阳性血清用样品稀释液(参见B.4)进行1:50稀释,即为 阳性血清对照。 4.3阴性血清对照 采集无母源抗体、未免疫猪细小病毒疫苗的健康猪血清,经血凝抑制试验检测,结果为猪细小病毒 抗体阴性,用样品稀释液(参见B.4)进行1:50稀释,即为阴性血清对照。 4.4包被液、洗涤液、封闭液、样品稀释液、酶标抗体稀释液、底物显色液、终止液配制方法分别见B.1、 B. 2、B. 3、B. 4、B. 5、B. 6、B. 7。 5器材和设备 一次性注射器、恒温培养箱、震荡混匀仪、移液器(200uL、1000μL)、多道移液器(200μL)、酶标板、 酶联免疫检测仪等。 1 NY/T2840—2015 猪细小病毒间接ELISA抗体检测方法 1范围 本标准规定了细小病毒科细小病毒属的猪细小病毒抗体的间接ELISA检测方法。 本标准适用于猪细小病毒抗体监测以及流行病学调查。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫 中华人民共和国农业部公告【2003】第302号兽医实验室生物安全技术管理规范 3缩略语 下列缩略语适用于本文件: PPV:猪细小病毒Porcineparvovirus ELISA:酶联免疫吸附试验Enzyme-linkedimmunosorbentassay OD:光密度opticaldensity r/min:转/分钟rotationsperminute 4试剂 4.1猪细小病毒VP2重组蛋白(re-VP2) 克隆猪细小病毒结构蛋白VP2抗原优势区基因,用pET-32a表达载体进行原核表达,亲和层析法 纯化重组蛋白。获得的重组蛋白浓度应≥1mg/mL,纯度应≥95%。具体过程见附录A。 4.2阳性血清对照 选取5月龄健康猪2头,用猪细小病毒疫苗按规定剂量进行免疫,间隔3周免疫2次,第二次免疫1 个月后开始采血分离血清,用血凝抑制试验测定其抗体效价。当抗体的血凝抑制效价达到1:1024时 采血分离血清,将血凝抑制效价为1:1024的阳性血清用样品稀释液(参见B.4)进行1:50稀释,即为 阳性血清对照。 4.3阴性血清对照 采集无母源抗体、未免疫猪细小病毒疫苗的健康猪
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