ICS 65.150 B 50 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T 7016.14—2019 鱼类细胞系 第14部分：锦鲤吻端细胞系（KS） Fish cell lines-Part 14:Koi snout cell line (KS 行业标准信息服务平台 2019-08-01发布 2019-11-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 SC/T7016.14—2019 前 SC/T7016《鱼类细胞系》为分部分标准，拟分为如下部分 第2部分：草鱼肾细胞系（CIK）； 第3部分：草鱼卵巢细胞系（CO）； 第4部分：虹鳟性腺细胞系（RTG-2）； 第5部分：鲤上皮瘤细胞系（EPC)； 第6部分：大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系（CHSE）； 第7部分：棕细胞系（BB）； 第8部分：斑点叉尾卵巢细胞系（CCO）； 第9部分：蓝鳃太阳鱼细胞系（BF-2)； 第10部分：狗鱼性腺细胞系（PG)； 第11部分：虹鳟肝细胞系（R1)； 第12部分：鲤白血球细胞系（CLC)； 第13部分：鲫细胞系（CAR）； 第14部分：锦鲤吻端胚细胞系（KS)； 本部分为SC/T7016的第14部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意文本的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由农业农村部渔业渔政管理局提出。 本部分由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156）归口。 本部分起草单位：中国水产科学研究院珠江水产研究所。 本部分主要起草人：王庆、王英英、曾伟伟、李莹莹、尹纪元、刘春、任燕、常藕琴、石存斌。 业标准信息服务平台 SC/T 7016.14—2019 鱼类细胞系 第14部分：锦鲤吻端细胞系（KS） 1范围 本部分规定了锦鲤吻端细胞系的术语和定义、缩略语、试剂和耗材、器材和设备、细胞形态与特性、细 胞培养条件、细胞传代和保存、质量检查。 本部分适用于锦鲤吻端细胞系的培养使用和保藏 规范性引用文件 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本 义件 S 3. 1 锦鲤吻端细胞系koi snout cell ine(KS) 2011年，用锦鲤的吻站 端组织经原代培养，衍生的连续细胞系 UR 4缩略语 下列缩略语 用王本 文件 GCRV:草鱼 平肠孤 KHV：锦鲤 疹病毒 范 koLherpesy 5试剂和材料 R 5.1水 应符合GB/T6682 5.2细胞培养液 配制方法参见附录 5.3细胞消化液 配制方法参见附录A.2。 服务平台 5.4PBS缓冲液 配制方法参见附录A.3。 5.5细胞冻存液 配制方法参见附录A.4。 5.6血清 胎牛血清(FetalBovineSerum,FBS)。 5.7试剂耗材 细胞培养瓶、移液器、移液管以及冻存管等培养细胞所用的耗材。 6 器材和设备 6.1培养箱（可恒温27℃）。 1 SC/T 7016.14—2019 6.2超净工作台。 6.3生物安全柜。 6.4倒置显微镜。 6.5细胞计数仪。 6.6液氮冻存罐。 7 细胞形态与特性 7.1形态 为上皮细胞，细胞呈椭圆形(参见附录B中图B.1)。 7.2大小 经细胞实时分析系统测定细胞悬浮后的平均直径约13.5μm（参见附录C)。 7.3特性 7.3.1生长特性 贴壁生长，传代后10h内细胞贴壁，24h后能基本长满单层细胞。 7.3.2对部分水生动物病原的敏感性 KS对KHV、GCRV等病毒敏感，KS接种KHV后，置于22℃培养3d～4d,细胞出现空泡状CPE， 5d7d，细胞单层呈网状；接种GCRV后，置于27℃培养，4d～5d，细胞出现融合性病变，随培养时间的 延长，细胞逐渐脱落，接种后的CPE形态参见图B.2和B.3。 8细胞培养条件 8.1培养温度 细胞置于生化培养箱内，在15℃～32℃下培养，最适生长温度为27℃。 9细胞传代和保存 9.1传代 9.1.1吸弃 挑选长满单层KS细胞的培养瓶，置超净工作台内，吸出旧培养液。 9.1.2消化和分散 用细胞消化液消化分散细胞。沿细胞培养瓶一侧加人细胞消化液，一般在25cm²细胞培养瓶中加入2 mL左右或按细胞培养瓶培养面每平方厘米加人0.05mL~0.1mL，加人量必须完全浸没细胞层。贴壁长满 的KS消化时间一般为2min～3min，细胞开始变圆便吸弃细胞消化液，轻轻拍打培养瓶以分散细胞。 9.1.3分瓶 拍打分散细胞后，在25cm²细胞培养瓶中加入10mL~15mL细胞培养液（参见附录A.1)，按每瓶5 mL分成2瓶～3瓶，使细胞终浓度达到1×105个/mL～2×105个/mL。在27℃培养，10h内细胞贴壁并 生长；24h后能基本长满单层细胞。 9.1.4传代周期 细胞长满单层2d3d后可再次传代。 9.2保存 9.2.1低温保存 传代后的KS经27℃下24h的培养后，移人培养箱15℃或20℃保藏。在15℃下可保存60d，20℃ 下可保存30d。 9.2.2冻存 在液氮中冻存，将一瓶25cm²的长满单层的KS细胞按9.1.2进行消化和分散。加入5mL细胞培 2