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ICS 11. 220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 680—-2003 禽白血病病毒p27抗原 酶联免疫吸附试验方法 Enzyme-linked immunosorbent assay for avian leukosis virus p27 antigen 行业标准信息服务平 2003-10-01实施 2003-07-30发布 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 680—2003 前 言 本标准的附录 A为规范性附录。 本标准由农业部畜牧兽医局提出并归口。 本标准起草单位:农业部兽医诊断中心。 本标准主要起草人:陈西钊、苏敬良、王宏伟、田克恭、吴清民、王传彬。 行业标准信息服务平 NY/T680--2003 禽白血病病毒p27抗原 酶联免疫吸附试验方法 1范围 本标准规定了禽白血病病毒(ALV)p27抗原酶联免疫吸附试验方法。 本标准适用于检测鸡蛋蛋清以及鸡胚组织细胞培养物中的ALVp27蛋白抗原。 2p27抗原酶联免疫吸附试验 2.1试验材料 2. 1.1试剂 2.1.1.1抗p27蛋白抗体:应用提纯的禽成髓细胞性白血病病毒p27蛋白免疫家免制备。 2. 1. 1. 2 阳性抗原:含鸡白血病/肉瘤病毒群特异性p27蛋白抗原的鸡蛋清。 2. 1. 1. 3P 阴性抗原:无鸡白血病/肉瘤病毒群特异性p27蛋白抗原的SPF鸡蛋清。 2.1.1.4 酶结合物:辣根过氧化物酶标记的抗p27蛋白抗体。 2. 1. 1.5 磷酸盐缓冲液(PBS):配制见第A.1章。 包被液:配制见第A.2章。 2.1.1.6 2. 1. 1. 7 洗涤液:配制见第A.3章。 2. 1. 1.8 样品稀释液:配制见第A.4章。 2. 1. 1. 9 底物溶液:配制见第A.6章。 2. 1. 1. 10 终止液:配制见第A.7章。 2.1.2器材 酶联检测仪; a) 聚苯乙烯板; b) c) 微量加样器,容量50μL~200μL; d) 37℃恒温培养箱。 2.1.3样品 2. 1. 3. 1 鸡蛋样品:将待检鸡蛋小的一端朝上放置,打碎蛋壳,用移液器无菌吸取蛋清,密装于灭菌小 瓶内。 2. 1.3.2 细胞培养物:用移液器无菌吸取细胞培养物,密装于灭菌小瓶内,4℃或30℃保存或立即送 检。试验前将送检样品统一编号,试验时不做稀释。 2.2操作方法 2.2.1用包被液将抗p27蛋白抗体作4000倍稀释,每孔100μuL加入96孔聚苯乙烯板中,4℃过夜。 2.2.2耳 取出包被好的聚苯乙烯板,将液体倒弃,每孔加250μL洗涤液漂洗三次,每次2min,甩干。 每孔加150μL质量浓度为1%的明胶封闭液,37℃反应60min。 2.2.34 2.2.4 重复2.2.2。 2.2.52 在A1、A,孔各加100μL标准阴性对照,As、A孔各加100uL标准阳性对照。 2.2.6) 将待检样品加入其他各孔,每个待检样本加两孔,每孔100uL,37℃反应60min。 2.2.7 重复2.2.2。 2.2.8 每孔加100μL工作浓度的辣根过氧化物酶标记的抗p27蛋白抗体,37℃反应60min。
NY-T 680-2003 禽白血病病毒p27抗原酶联免疫吸附试验方法
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