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SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1146—2010 代替SN/T1146—2002 烟草环斑病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of tobacco ringspot virus 行业标准信息服务平台 2010-05-27发布 2010-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1146—2010 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准代替SN/T1146一2002《烟草环斑病毒检疫鉴定方法》。 本标准与SN/T1146一2002相比,主要技术变化如下: 删除了原标准规范性附录A; 增加了“症状检查”二节(见6.3); —免疫电镜方法按照SN/T1840一2006《植物病毒免疫电镜检测方法》标准(见7.3)。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。 本标准主要起草人:陈枝楠、邓琼、郑耘、凌杏园、郑文华、王东勇。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为: SN/T 1146—2002。 行业标准信息服务平台 I SN/T1146—2010 烟草环斑病毒检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了进出境植物检疫中对烟草环斑病毒的检疫鉴定方法。 本标准适用于进出境植物及其产品中烟草环斑病毒的检疫鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件,凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 SN/T1840植物病毒免疫电镜检测方法 SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样规则 3原理 烟草环斑病毒(tobaccoringspotvirus,简称TRSV),异名为银莲花坏死病毒(anemonenecrosis virus)、蓝莓坏死环斑病毒(blueberrynecroticringspotvirus)、烟草环斑病毒1号(tobaccoringspot virus1)。该病毒为等轴多面体球状病毒,直径为25nm~29nm,属线虫传多面体病毒属成员,可侵染 54科、300多种植物,其中主要的经济作物有豆类、马铃薯、甘薯、烟草、西瓜、黄瓜、甜瓜、胡萝下、唐 蒲、百合、鸢尾、李属、苹果、葡萄、甜樱桃等。受TRSV侵染的植株症状因寄主而异,通常叶片出现环状 或线状纹、褪绿斑或斑驳、坏死斑:根腐烂、茎顶枯、所结的果畸形等。该病毒主要依靠线虫和种子进行 备高滴度、专化性强的病毒抗血清等特点(参见附录A)。通过血清学双抗体夹心法(DAS-ELISA)结合 鉴别寄主生物学鉴定方法或免疫电镜检测,作为检疫工作中鉴定该病毒的依据。 4用具、设备、设施 研钵、微量榨汁机、酶标仪、低速离心机(转速为4000r/min)、生物培养箱(具有光照,温度可调范 μL、1000μL)、8道移液器(100μL或200μL)、恒温水浴锅或恒温培养箱、分析电子天平pH计、白瓷 盘(40cm×50cm)、钝头镊子、隔离检疫温(网)室。 5试剂 5.110×PBST缓冲液 将氯化钠(NaCI)80g、磷酸二氢钾(KH,PO,)2g、磷酸氢二钠(NazHPO,)11.5g、氯化钾(KCl) 2g、吐温-20(Tween-20)5mL溶于蒸馏水,定容至1000mL。 5.2样品提取缓冲液 将亚硫酸钠(Na2SO:)1.3g、聚乙烯基吡略烷酮(MW24000~40000.PVP)20g、叠氮钠(NaN,) 1
SN-T 1146-2010 烟草环斑病毒检疫鉴定方法
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